Le principe de la cytométrie en flux est l'isolement et l'analyse de cellules qui sont agencées sur une seule ligne comme elles coulent dernier d'un détecteur dans un flux.
Une machine sortes et compte les cellules qui ont été étiquetés ou marqués à l'aide de colorants fluorescents ou d'autres méthodes.
Les étiquettes qui sont utilisés dépendent de la lampe ou laser qui est utilisé dans l'analyseur. Cette lampe ou la lumière excite les fluorochromes qui sont détectés par le dispositif.
Il existe plusieurs étiquettes ou des fluorophores qui sont utilisés en cytométrie de flux.Ces fluorophores ou des substances fluorescentes sont généralement fixés à un anticorps qui reconnaît un élément de cible soit affichée sur la cellule ou à l'intérieur.
Les substances fluorescentes peuvent également être attachées à un produit chimique qui est attiré par une structure de la cellule tel que sa membrane. Chacune des substances fluorescentes a une pic particulière excitation et d'émission de longueur d'onde.
Les types d'étiquettes utilisées dépendent de la longueur d'onde du laser qui excite les fluorophores, ainsi que sur les détecteurs disponibles.
Parfois, les points quantiques sont utilisés à la place des substances fluorescentes parce que les points ont des pics d’émission étroite.
Dans cytometery de débit massique, l'étiquetage multiple est effectué en utilisant des isotopes lanthanides aux anticorps. Ceci permet le plus grand nombre d'étiquettes 30 doivent être utilisés.
Étiquettes disponibles
Des exemples de certaines des étiquettes disponibles sont donnés ci-dessous:
• Laser bleu d'argon (488 nm) - Ceci est un laser refroidi à l'air et est donc plus facile à configurer et à utiliser. Il est utilisé dans les machines laser simples. Certains des étiquettes utilisées pour ce laser comprennent:
• Pour le canal vert sur FL1 - Alexa Fluor 488, GFP, FITC, CFSE, DyLight 488 ou CFDA-S’est utilisé
• Pour le canal Orange sur FL2 - PE ou PI est utilisé
• Pour le canal rouge sur FL3, habituellement - PE-Alexa Fluor 700, PerCP-Cy5.5, PerCP, PE-Cy5.5 ou PE-Cy5 est utilisé
• Pour le canal infrarouge généralement sur FL4 (cette fonctionnalité ne sont pas disponibles pour tous les cytomètres de flux) - PE-Cy7 ou PE-Alexa Fluor 750 est utilisé
• Diode laser rouge (635 nm) - Les étiquettes utilisées incluent APC-Cy7, APC-eFluor 780, Alexa Fluor 700, Cy5, APC, Draq-5
• laser violet (405 nm) - Les étiquettes utilisées comprennent Amine Aqua, Pacific orange, bleu Pacifique, DAPI, Alexa Fluor 405, eFluor 450, 605 eFluor nanocristaux, eFluor 625 nanocristaux ou eFluor 650 Nanocrystals
