Le principe de base de cytométrie en flux est le passage de cellules dans la file face à un laser afin qu'elles puissent être détectées, comptées et triées.
Les composants cellulaires sont marqués par fluorescence et excités par le laser pour émettre de la lumière à différentes longueurs d'onde.
La fluorescence peut ensuite être mesurée pour déterminer la quantité et le type de cellules présentes dans un échantillon.
Jusqu'à milliers de particules par seconde peuvent être analysées comme ils passent à travers le flux de liquide.
Un faisceau de lumière laser est dirigé sur un flux hydrodynamique axé de liquide qui transporte les cellules.
Plusieurs détecteurs sont soigneusement placés autour de la rivière, à l'endroit où le fluide traverse le faisceau lumineux.
L'un de ces détecteurs est en ligne avec le faisceau de lumière et est utilisé pour mesurer Forward Scatter ou FSC.
Un autre détecteur est placé perpendiculairement à la rivière et est utilisé pour mesurer Side Scatter (SSC).
Depuis étiquettes fluorescentes sont utilisées pour détecter les différentes cellules ou des composants, des détecteurs fluorescents sont également en place.
Les particules ou les cellules en suspension, qui peut varier en taille de 0,2 à 150 um, passent à travers le faisceau de lumière et dispersent les faisceaux lumineux.
Les composants de cellules marquées par fluorescence sont excités par le laser et émettent de la lumière à une longueur d'onde plus longue que la source de lumière. Il est ensuite détecté par les détecteurs.
Les détecteurs choisissent donc une combinaison de lumière diffusée et fluorescent. Ces données sont ensuite analysées par un ordinateur qui est attaché à la cytomètre en flux en utilisant un logiciel spécial.
La luminosité de chaque détecteur (une pour chaque pic d'émission de fluorescence) est ajustée en fonction de cette détection.
En utilisant les mesures de la lumière, différentes informations peuvent être recueillies à propos de la structure physique et chimique des cellules.
En général, le FSC est capable de détecter le volume de la cellule tandis que la SSC reflète la complexité interne de la particule telle que sa teneur en granules cytoplasmiques ou de la structure nucléaire.
