La cytométrie en flux est une technologie qui est utilisée pour analyser les caractéristiques physiques et chimiques des particules dans un fluide qui passe dans au moins un laser. Les composants cellulaires sont marqués par fluorescence et excités par le laser pour émettre de la lumière à différentes longueurs d'onde.
La fluorescence peut être mesurée pour déterminer diverses propriétés des particules simples, qui sont habituellement des cellules. Jusqu'à milliers de particules par seconde peut être analysée comme ils passent à travers le flux de liquide. Des exemples des propriétés mesurées comprennent la granularité de la particule par rapport, la taille et l'intensité de la fluorescence ainsi que sa complexité interne. Un système de couplage optique-électronique est utilisé pour enregistrer la façon dont les particules et émet une fluorescence diffuse la lumière incidente provenant du laser.
Trois systèmes principaux constituent le cytomètre en flux instrument et ce sont les fluidique, l'optique et l'électronique. Le but du système fluidique est de transporter les particules dans un courant de fluide au faisceau laser, où ils sont interrogés. Toute cellule ou d'une particule qui est de 0,2 à 150 μms taille peuvent être analysés. Si les cellules sont de tissu solide, ils ont besoin désagrégation avant qu'ils puissent être analysés. Bien que les cellules provenant d'animaux, plantes, bactéries, levures ou d'algues sont généralement mesurés, d'autres particules telles que des chromosomes ou des noyaux peuvent aussi être examinées. Des particules telles que les algues marines sont naturellement fluorescentes, mais en général, les marqueurs fluorescents sont nécessaires pour étiqueter les composants de la particule. La section du courant de fluide contenant les particules est désignée comme le noyau de l'échantillon.
Le système optique est constitué de lasers qui éclairent les particules présentes dans le flux lors de leur passage à travers et diffusent la lumière provenant du laser. Tous les molécules fluorescentes qui sont sur la particule émettre une fluorescence, qui est détecté par les lentilles judicieusement positionnées. En général, la lumière diffusée à partir de jusqu'à six ou plus fluorescences est déterminée pour deux angles différents. Les filtres optiques et séparateurs de faisceaux dirigent alors les signaux lumineux aux détecteurs pertinents, qui émettent des signaux électroniques proportionnels aux signaux qui les frappent. Les données peuvent ensuite être recueilli sur chaque particule ou d'un événement et les caractéristiques de ces événements ou des particules sont déterminées en fonction de leurs propriétés fluorescentes et diffusion de la lumière.
Le système électronique est utilisé pour modifier les signaux lumineux détectés en impulsions électroniques qu'un ordinateur peut traiter. Les données peuvent ensuite être étudiées pour vérifier des informations sur un grand nombre de cellules sur une courte période. Information sur l'hétérogénéité et au sein de différents sous-ensembles des populations de cellules peut être identifiée et mesurée. Certains instruments ont une fonction de tri dans le système électronique qui peut être utilisé pour charger et dévier les particules de telle sorte que certaines populations cellulaires peuvent être triés pour une analyse plus approfondie.
Les données sont généralement présentées sous la forme d'histogrammes de paramètres individuels ou des parcelles de paramètres corrélés, qui sont désignés comme cytogrammes. Les cytogrammes peuvent afficher des données dans l'partir d'un tracé de points, un tracé de contour ou une parcelle de densité.
Applications
La cytométrie en flux est utilisée pour effectuer plusieurs procédures, y compris:
• Le comptage des cellules
• Tri cellulaire
• La détection de biomarqueurs
• L'ingénierie des protéines
La cytométrie en flux a de nombreuses applications dans la science, y compris celles qui concernent la santé. La technologie a été largement utilisé dans le diagnostic de conditions de santé, en particulier les maladies du sang telles que la leucémie, mais il est aussi couramment utilisé dans les différents domaines différents de la pratique clinique, ainsi que dans la recherche fondamentale et les essais cliniques.
Voici quelques exemples des domaines, cette technologie est utilisée dans comprennent la biologie moléculaire, l'immunologie, la pathologie, la science marine et la biologie végétale. En médecine, la cytométrie en flux est un processus de laboratoire essentiel utilisé dans la transplantation, l'oncologie, l'hématologie, la génétique et le diagnostic prénatal. En biologie marine, l'abondance et la répartition du plancton photosynthétique peuvent être analysés.
La cytométrie en flux peut également être utilisé dans le domaine de l'ingénierie des protéines, pour identifier les variants de protéine de la surface cellulaire.
